第二章 红细胞检查

红细胞检查内容：

RBC是血液中最多的一种血细胞，其检查包括红细胞计数、血红蛋白测定、红细胞形态观察、红细胞平均指数计算、网织红细胞计数、红细胞沉降率等。

形态：无核，双凹圆盘形 不染色：呈草黄色

RBC的生成及破坏：(见PPT)

早幼红细胞 中幼红细胞 干细胞原始红细胞 晚幼红细胞 网织红细胞 成熟红细胞

一、红细胞计数(red blood cell count)

【原理(principle)】

血液用等渗稀释液稀释一定倍数→滴入血细胞计数盘→显微镜下计数一定范围内的RBC

数→换算得每升血液中的RBC数。

【参考范围(range)】

成年女性:(3.5～5.0)×1012/L

成年男性:(4.0～5.5)×1012/L

新生儿：(6.0～7.0)×1012/L

婴儿：(4.0～4.3)×1012/L

儿童：(4.0～4.5)×1012/L

【临床意义(clinical meaning)】

一、生理性变化

(一)生理性增多

1.机体缺氧而使RBC代偿性↑：新生儿、高原生活、强烈的体力劳动

2.成年男性比女性高：男性在6～7岁时最低，25～30岁时达高峰。女性21～35岁维持最低水平。

3.其他：抽烟、肾上腺素及糖皮质激素的应用等

(二)生理性减少

1.生长发育造血原料相对不足：从6个月至2岁婴幼儿

2.造血功能减退：部分老年人生理性贫血

3.血容量增加：妊娠中晚期

二、病理性变化

(一)病理性增多

1.相对增多：血液浓缩

2.绝对性增多：①继发性增多：如心肺疾病②原发性增多：如真性RBC增多症

高于6.8×1012/L应采取治疗措施

(二)病理性减少

1.RBC生成减少：※骨髓功能衰竭：AA ※造血物质缺乏或利用障碍：IDA、MA

2.RBC破坏过多：※内在缺陷 ※外在异常

3.RBC丢失过多：低于1.5×1012/L应考虑输血

二、血红蛋白测定Hemoglobin measurement

(一)Hb分子结构及成分：

血红蛋白(hemoglobin，Hb或HGB)是人体有核红细胞及网织红细胞内合成的含色素辅基的结合蛋白质，由珠蛋白和亚铁血红素组成。

0.347g铁相当于100gHb;每克Hb可携带1.34ml氧。

4.其它：

①还原Hb：Fe2+

②氧合Hb：与O2结合的Hb

③Hb衍生物：HbCO、SHb

④高铁Hb：Fe3+

2014年6月17日59P24

(二)Hb的测定：

ICSH(International council for standardization haematology)推荐氰化高铁血红蛋白测定法(HiCN)

1.原理:Hb是色素蛋白，在血液中以多种形式存在，利用高铁氰化钾将Hb氧化成高铁血红蛋白(Hi)，Hi可与CNˉ结合成氰化高铁血红蛋白，在540nm处有一吸收峰，用分光光度计测定其吸光度，换算成每升血液中血红蛋白的含量。

方法学评价

(1)氰化高铁血红蛋白测定法

优点：①操作简单、显色稳定，便于推广。

②转化液较稳定，易保存。

③除SHb外各Hb均可测读A后直接计数。

④HiCN参考品可长期保存，便于质控。

缺点：①KCN剧毒，易污染环境。

②不能测SHb，HbCO转化慢。

③浊度高引起Hb浓度假性增高：高球蛋白血症，脂血，试剂混浊，WBC和Plt高。

(2)十二烷基硫酸钠血红蛋白(SDS-Hb)测定法

SDS能破坏WBC，摩尔消光系数未定。

(3)碱羟血红蛋白测定法：

HbF不能转化，最大吸收峰在575nm。

(4)叠氮高铁Hb测定法：

具有与HiCN法相似的优点，但仍存在试剂污染。

(5)溴代十六烷基三甲铵血红蛋白测定法：

不破坏WBC，精密度、准确性略低。

2014年6月17日65P25

4.参考值

新生儿：170～200g/L女：110～150g/L

男：120～160g/L

70岁以上老年人：男：94～122g/L女：87～112g/L

质量控制(1)血清浊度：(2)器材及试剂质量：(3)技术与操作：(4)废弃物的处理：

临床意义与RBC计数相似

(1)鉴别贫血类型：

IDA：RBC↓Hb↓↓MA：RBC↓↓Hb↓

(2)影响检验结果的因素：血液总容量改变全身血浆容量改变

教学目标：

掌握：血红蛋白测定的原理、Hb成分、种类及测定临床意义;网织红细胞的形态、计数

方法及测定的临床意义。

熟悉：血涂片制备与染色、红细胞的形态学改变。

了解：Hb测定的方法学评价。

血红蛋白测定Hemoglobin measurement

(一) Hb分子结构及成分：

血红蛋白( hemoglobin，Hb或HGB )是人体有核红细胞及网织红细胞内合成的含色素辅基的结合蛋白质，由珠蛋白和亚铁血红素组成。

血涂片制备与染色

血涂片的制备

(一)载玻片和推片：

载玻片推片

载玻片：清洁、干燥、中性、无油腻。

推片：边缘光滑。

(二)血涂片制作：

良好血涂片：

①血膜至少长25mm。

②边缘整齐，两侧、两端留有空隙。

③头体尾分明：细胞从厚区到薄区逐步均匀分布。

④血膜末端无粒状、画线或裂隙。

(三)制备血涂片的影响因素

推制适当的血膜角度大，速度快→太厚，太短

推片边缘不光整→刷尖用力不均→厚薄不匀

血量过多、血液粘度高→无尾载玻片有油腻

血涂片染色

染色就是染料透入被染物并存留其内部的过程。

1..瑞氏染色法是血液染色最经典和最常用的染色法。

2.吉姆萨染色法

3.瑞氏吉姆萨复合染色法

4.细胞活体染色法

5.巴氏染色法

6.苏木素-伊红染色法

(一)瑞氏染色法(Wright Stain)

1. 瑞氏染料成分：

⑴ 美蓝(又称亚甲蓝 ，methylene blue，M+)

通常为氯盐，氯化美蓝(MCl)，阳离子，一种碱性染料。

⑵ 伊红(eosin Eˉ)：

通常为钠盐(NaE)，阴离子，一种酸性染料。

⑶ Wright染料

MCl + NaEME+ NaCl

⑷ 甲醇(溶剂、固定剂)：

① MEM+ + Eˉ

② 具有强大的脱水力。

可将细胞固定为一定形态;使蛋白沉淀为颗粒状、网状等结构;增强染色效果;

染色原理：物理的吸附作用 和化学的亲和作用

正常情况染色结果：

外观：淡紫红色

镜下：① RBC呈粉红色，略有碟状感。

② WBC浆中颗粒清楚，并显示各种细胞特有的色彩。

③ 细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。

RBC嗜碱性颗粒 中性颗粒 嗜酸性颗粒

3. PH对细胞染色的影响：

PH↓→ 正电荷增多→ 易与伊红结合 →染色偏红

PH↑→ 负电荷增多→ 易与美蓝结合 →偏蓝

染色的质量保证

染液质量

染色时间与染液浓度

染色过程

染液的冲洗

脱色与复染

4.方法学评价：

瑞氏染色法：

优点：对于细胞质成分及中性颗粒等的染色可获得很好的染色效果，

缺点：对细胞核的染色不如吉姆萨染色

吉姆萨染色：

原理：同瑞氏染色。

优点：本法对细胞核染色较好，结构更清晰。

缺点：胞质和中性颗粒染色较差。

瑞-吉复合染色：取长补短。