采用放射性碘制备标志物的基本原理是以放射性碘原子通过取代反应置换被标志物分子中酪氨酸或酪胺残基以及组胺残基上的氢原子。因此，凡蛋白质、肽类等化合物在结构上含有上述基团，均可用125I直接标记。而对那些不含上述基团的甾体激素或药物分子则必须在分子结构上连接相应基团才能用于放射性碘标记（间接标记法）。