在测定抗原的ELISA双位点一步法时，应用针对同一抗原分子上的两个不同抗原决定簇的单克隆抗体，分别作为固相抗体和酶标抗体，在测定时可同时加入标本和酶标抗体（两步并作一步）。显色反应后颜色深浅与待测抗原量呈正相关。但要注意，如果标本中抗原含量过高，会出现钩状效应（hookeffect），可能影响结果的准确性。为避免钩状效应，可将样本稀释后再加样。