Km值是当酶促反应速度为最大速度半时的底物浓度。Km可用来表示酶与底物亲和力的大小。Km值是酶的特征性常数之一，与酶的结构、底物和反应环境有关，与酶的浓度无关。酶的种类不同，Km值不同，对于同一底物，不同的酶有不同的Km值；同一种酶与不同底物作用时，Km值也不同，其中Km最小的底物称为该酶的最适底物或天然底物。米氏方程式为：V=Vmax[S]/Km+[S]。