在凝胶层析中，大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔中，而只能分布于颗粒之间，在洗脱时移动的速度较快；小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，不断地进入和扩散，因此小分子物质的下移速度要落后于大分子物质，从而使大分子物质先流出色谱柱。