玻片法检测葡萄球菌凝固酶时，不能采用生长于高盐琼脂上的菌落，因为高盐环境可能导致细菌自凝或出现假阳性结果。A项，试管法中受检菌株不纯或污染确实可导致假阳性，该项正确；B项，中间葡萄球菌凝集出现时间长于4h，符合实际情况，该项正确；D项，使用非无菌血浆可能产生假阳性或假阴性结果，也是正确的；E项，产葡激酶的菌株在延长孵育时间可出现假阴性结果，同样正确。