25-(OH)-D3的1位羟化主要发生在肾脏。在肾脏的近端小管中，通过1α-羟化酶（CYP27B1）的催化作用，25-(OH)-D3转化为1,25-(OH)2-D3。这一过程是维生素D代谢中的关键步骤，最终生成的1,25-(OH)2-D3具有更强的生物活性，在体内发挥重要的生理作用。