丙氨酸氨基转移酶（ALT）速率法作用的底物是丙氨酸和α-酮戊二酸。在该测定方法中，丙氨酸与α-酮戊二酸在ALT的作用下生成丙酮酸和谷氨酸，丙酮酸在乳酸脱氢酶的作用下进一步转化为乳酸，同时伴随着NADH的氧化，这一过程导致340nm处吸光度的下降。通过连续监测这一下降速率，可以计算出ALT的浓度。